年12月开始,在我国暴发了一种新的以肺炎为特征的呼吸系统疾病。年1月12日经分离鉴定,确认为一种新型冠状病*,并被WHO命名为-nCoV。随后,由该新型冠状病*引起的肺炎,迅速传播至全国30多个省市。
一,冠状病*的生物学
冠状病*,是自然界广泛存在的一大类病*,是人畜共患病*的一大家族,可以感染人、鼠、猪、猫、犬、蝙蝠与禽类脊椎动物。到目前为止,大约有17种不同冠状病*株被发现,其中有6种感染人。国际病*学分类委员会将冠状病*科分为4个属即α、β、γ和δ属。这意味着它们很容易从动物传播给人类,范围从流感样疾病到致命的呼吸道疾病。冠状病*是单股正链RNA病*,直径约60~nm。有包膜,包膜上存在棘突,整个病*像日冕,不同的冠状病*的棘突有明显的差异。包膜表面有3种糖蛋白:刺突蛋白(SpikeProtein,S蛋白,是受体结合位点、溶细胞作用和主要抗原位点);包膜蛋白(EnvelopeProtein,E蛋白,较小,与包膜结合的蛋白);膜蛋白(MembraneProtein,M蛋白,负责营养物质的跨膜运输、新生病*出芽释放与病*外包膜的形成)。以前流行的人冠状病*,主要是E株、OC43株、NL63株和HKU1株。最近几年,发现了致病性更高的人冠状病*的新成员,即-年的严重急性呼吸系统综合症冠状病*(SARS-CoV)、年的中东呼吸系统综合症冠状病*(MERS-CoV)。故此,年的新型冠状病*(-nCoV),被称为第7种人冠状病*,它属于β冠状病*属、Sarbe亚属。新型冠状病*与2份来自蝙蝠体内的SARS样冠状病*株组成Sarbe亚属B谱系中的一个新分支;来自人体的SARS冠状病*则与中国西南部蝙蝠体内分离到SARS样冠状病*组成Sarbe亚属B谱系中的另外一个分支。可见,新型冠状病*是SARS冠状病*的近亲。人冠状病*(HCoV)于年首次被报道,它还是所有年龄段普通感冒的病原之一,与夏季和秋季相比,冬季和春季感染的发生率更高。人冠状病*感染在全世界非常普遍,人群中普遍存在冠状病*抗体,成年人高于儿童。各国报道的人群抗体阳性率不同,我国人群以往冠状病*抗体阳性率在30%至60%。临床上,多数冠状病*引起轻度和自愈性疾病,但少数可有严重的肺炎、神经系统并发症。人冠状病*通过呼吸道分泌物排出体外,经口液、喷嚏、接触传染,并通过空气飞沫传播,感染高峰在秋冬和早春。年1月20日,国家卫生健康委员会公告(年第1号),根据《传染病防治法》的相关规定,基于目前对新型冠状病*感染的肺炎的病原、流行病学、临床特征等特点的认识,报国务院批准同意,国家卫生健康委决定将新型冠状病*感染的肺炎纳入法定传染病乙类管理,采取甲类传染病的预防、控制措施。新型冠状病*感染的肺炎纳入法定传染病管理,各级人民*府、卫生健康行*部门、其他*府部门、医疗卫生机构可以依法采取病人隔离治疗、密切接触者隔离医学观察等系列防控措施,共同预防控制新型冠状病*感染的肺炎疫情的传播。
二,冠状病*的抵抗力
冠状病*作为呼吸道传播的主要病原体,在自然界中各个储存宿主之间相互传播,对各种自然环境因素都具有较高的抵抗力。其抵抗力主要受到温度、湿度的影响。以前发现的4种人冠状病*,由于引起的呼吸道症状轻,类似普通感冒。人冠状病*(HCoV)引起普通感冒的1/3,医院获得的上呼吸道HCoV感染的报道。为了评估可能的感染源,有人研究了病*悬浮液在医院环境的吸收性和非吸收性表面上的存活率。病*可以在盐溶液中存活长达6d,而在有或没有添加细胞的培养基中存活的时间要短。干燥3h后在各种表面(铝,无菌乳胶外科手术手套,无菌海绵)上仍可检测到HCoV-E的感染性。近年来,因为病*变异引起的重症呼吸系统疾病的冠状病*陆续出现,其抵抗力的研究才引起重视。学术界认为,SARS-CoV感染的主要传播途径是呼吸道飞沫。但是也可以检测到该病*在其他体液和排泄物中。因此,在不同的排泄物中,SARS-CoV的抵抗力也不一样。年,我国学者首先评估了SARS-CoV在外界环境物品中生存的能力。将实验室培养的高滴度的SARS-CoV的BJ-01株,人工污染在灭菌后的塑料片、玻璃片、棉布片、滤纸片、不锈钢片和木片的表面,或混合在灭菌土壤和自来水样品中,室温下存放不同时间后,用细胞培养法检测SARS-CoV。结果,SARS-CoV在模拟污染的玻璃片、不锈钢片、塑料片上可以存活至少2d,在模拟污染的滤纸片、木片、棉布片、土壤上至少可存活4~6h,在污染的自来水中2d仍然保持较强的感染性。该研究提示SARS-CoV在外界环境物品中具有较强的生存能力。干燥可以促进SARS-CoV死亡。WHO利用其成员实验室:中国香港特别行*区*府病*实验室、医院、日本国家传染病研究所、德国Marburg大学实验室,同样共同验证了SARS-CoV的抵抗力。结果,在塑料表面的SARS-CoV在室温下至少能够生存2d,在有腹泻病人的粪便中至少能够生存4d,SARS-CoV的一个显著特点是怕热不怕冷,0℃和4℃至少生存4d,甚至多达21d。在37℃条件下,SARS-CoV存活不到4d,在56℃时,病*的生存时间不超过30min。这些结果表明SARS-CoV的生存能力比人们想象的要顽强得多。此外,还医院(年北京SARS医院)空气中SARS-CoV的污染情况,医院每天采集19个空气样品,4d共采集76个空气样品。最终在病房、内走廊、护士站和病房排气口下风向5m处4个地点均有SARS-CoV核酸检出,其中以病房排气口下风向5m处的阳性率最高(58.3%),病房(52.1%)和内走廊(50.0%)的阳性率相当,护士站相对较低(25.0%)。但在病房外面的空气中没有检测到活的SARS-CoV。为了观察SARS-CoV在污水、尿液、粪便中的存活情况。医院取患者的粪便和尿样,污水取自解放*医院(SARS医院)和生活小区的生活污水。采用SARS-CoV加标实验方法。结果发现,加标的SARS-CoV的存活情况随温度而异,20℃医院污水、生活污水和脱氯自来水中只能存活2d,在粪便中可以存活3d,在生理盐水中可以存活14d,在尿液中可以存活17d;4℃情况下,SARS-CoV在上述各种水体中均可以存活14d以上,在粪尿中可以存活17d以上。香港也有学者研究了SARS-CoV在光滑表面上不同温度和相对湿度下的稳定性。干燥的病*在光滑的表面上,在22~25℃和相对湿度为40%~50%下,即典型的空调环境下,可以保持5d以上的生存能力。SARS-CoV在低温低湿环境下,具有很好的稳定性,可能促进其在亚热带地区(如中国)的社区传播。但是,在更高的温度和较高的相对湿度(例如38℃,相对湿度95%)下,病*生存力迅速丧失(3log10)。这也可以解释为什么一些热带地区亚洲国家(例如马来西亚、印尼或泰国)高温和相对湿度高的环境,可以阻止SARS的社区暴发。中东呼吸综合症(MERS)是一种由新的β冠状病*(MERS-CoV)株引起的急性病*性呼吸道疾病,死亡率高。自年在沙特阿拉伯报道第1例患者以来,医院医院间传播引起的大规模暴发。韩国报医院环境中也受到感染。但未查阅到MERS-CoV抵抗力研究数据。然而,回顾MERS医院的感染控制经验以及国内外感染预防和控制指南,基本与SARS防控相似。均要求全面的感染控制措施,包括接触控制,手卫生,个人防护设备,消*和环境清洁。年1月27日,中国疾病预防控制中心病*病所,从武汉华南海鲜市场的份环境样本中,检测到33份样品含有新型冠状病*核酸,并成功在阳性环境标本中分离病*,从电镜观察、PCR和深度测序结果均提示,成功从环境样本中分离到新型冠状病*,进一步证实在华南海鲜市场环境中存在着大量的新型冠状病*-nCoV。由此估计-nCoV在冬季寒冷的环境下,具有很强的抵抗力,可以像SARS-CoV一样,冬季至少存活数天以上。从以上冠状病*在各种环境中的抵抗力数据分析,对病人生活的环境、可能污染的物品,以及废弃物、污水、排泄物等,进行定时清洁与消*处理,是非常必要的。
三,常用消*方法对冠状病*的灭活效果
冠状病*属于有包膜的亲脂类病*。按照人类认知的所有微生物对消*处理的抗力大小,有包膜的病*属于最容易杀灭的微生物。所有批准上市的消*剂、消*器械、物理消*方法,都能够有效杀灭冠状病*。下面的研究,进一步证明了这个结论。
1.物理消*法
年,*事医学科学院P3实验室,将SARS病*培养的上清液(TCID50)分装到10mL离心管中,然后分别放入56℃和70℃水浴中,间隔一定时间以后,取样0.5mL,接种VERO-E6细胞,观察感染性。结果发现,56℃加热30min、70℃加热15min后,SARS-CoV细胞培养检测,均不能检出有活病*。同样的结果,也被中国疾病预防控制中心病*病所的研究证实,他们的工作发现,病*悬液在56℃以上作用30min,或者紫外线照射60min,均可以完全灭活SARS-CoV的活性。Ansaldi等人,在实验室内研究了紫外线对SARS-CoV、甲型流感病*与呼吸道合胞病*的灭活效果。将试验用的病*悬液,暴露于紫外线(40mW/cm2)下,分别作用30s、1min、2min、5min、15min、30min,然后测定残留的病*滴度,并进行核酸PCR定性测定。结果发现,作用2min即可破坏病*的核酸,使病*失去全部活性。Stibich等人,报告了一种紫外线消*器,对物体表面与悬液中的MERS-CoV、以及Ebola病*、水泡性口炎病*(VSV)等致病性病*,作用5min,即可具有良好的杀灭效果。Pratelli报告,犬冠状病*(CCoV)的感染性,在56℃情况下最多可保持30min,但在65℃和75℃时往往迅速下降。同时,作者认为,CCoV灭活方法可以用作动物模型来研究人类冠状病*感染,从而降低研究人员在常规实验室程序中意外接触病原体的风险。
2.化学消*法
Ansaldi等人,在实验室内研究了常用消*剂对SARS-CoV、甲型流感病*与呼吸道合胞病*的灭活效果,同时测定残留的病*滴度与核酸(PCR)。结果发现,0.%过氧乙酸、70%乙醇和0.05%次氯酸钠,作用2min,即可灭活3种病*的感染活性,但是核酸的完全破坏,需要延长时间至30min。0.1%次氯酸钠与2%浓度2-苯甲基氯酚具有更强的消*作用,不足2min,就能完全灭活病*复制,并破坏病*基因组。特别是0.1%次氯酸钠显示出更快速的作用,作用1min,SARS-CoV、流感病*、RSV均无法复制,基因组完全破坏。该结果通过电子显微镜观察得到进一步确认,其病*结构似乎完全被破坏。1%葡萄糖酸氯己定和1%苯扎氯铵,同样具有良好的杀病*活性,接触作用1min,就抑制了RSV复制。1%的苯扎氯铵作用5min,可以灭活SARS-CoV的复制活性。1%葡萄糖酸氯己定在所有测试时间,均可灭活SARS-CoV的复制活性。但是,这2种消*剂对试验中的3种病*,作用时间延长到30min,仍可检测到RNA阳性。国内有人依据年版《消*技术规范》中规定的病*灭活试验方法,有人研究了一种含有~mg/L醋酸氯己定的复方消*乳液,对SARS-CoV的灭活效果,敏感细胞系为Vero-E6细胞系,结果发现该消*液作用1min、2min、3min,均能够灭活5Log滴度以上的测试病*。王新为等人,医院污水的消*效果,使用的消*剂是次氯酸钠和二氧化氯。采用SARS冠状病*加标方法。结果发现,SARS冠状病*在污水中对消*剂的抵抗力比大肠杆菌及f2噬菌体都低,在相同加氯量或余氯量情况下,氯制剂对SARS冠状病*的灭活效果优于二氧化氯。当污水中游离余氯量保持在0.5mg/L(氯制剂)或2.19mg/L(二氧化氯)以上时可以保证完全灭活污水中的SARS冠状病*,但对大肠杆菌和f2噬菌体则不能完全灭活。Pratelli报告,犬冠状病*(CCoV)的感染性,在pH值为6.0~6.5时更稳定,而极端酸性条件使病*灭活。两种测试的醛类消*剂能完全灭活病*,但它们的作用取决于温度和时间。Hulkower等人,利用2株冠状病*的替代病*,鼠肝炎病*(MHV)和传染性胃肠炎病*(TGEV),使用定量载体(不锈钢表面)方法,医院常用化学消*剂(一种酚类消*剂邻苯基苯酚/对叔戊基苯酚、70%乙醇、1:次氯酸钠、邻苯二甲醛、含62%乙醇的快速手消*剂、含71%乙醇的卫生手消*剂)的灭活效果。结果发现,作用1min后,TGEV的对数减少值为:70%乙醇3.2,酚类2.0,邻苯二甲醛2.3,1:次氯酸钠0.35,含62%乙醇的快速手消*剂4.0、含71%乙醇的卫生手消*剂3.5。MHV的对数减少值为:70%乙醇3.9,酚类1.3,邻苯二甲醛1.7,1:次氯酸钠0.62,含62%乙醇的快速手消*剂2.7、含71%乙醇的卫生手消*剂2.0。这个结果,提示乙醇具有非常快速的杀灭SARS-CoV的作用。针对MERS-CoV的化学消*,我医院,在收治MERS病人时,对医院病人接触的物品与环境,采用~0mg/L有效氯喷雾、擦拭消*严重污物的表面,~mg/L有效氯消*潜在污染区,~mg/L有效氯消*清洁区表面。对不耐腐蚀的物体表面采用75%(V/V)乙醇消*剂喷洒至表面湿润,或用75%(V/V)乙醇与一次性医用消*湿巾擦拭,消*作用至表面干燥。整个治疗过程中,医护人员零感染,病人痊愈出院。
四,冠状病*的消*指南
通过对SARS、MERS疫情期间各国推出的各种消*指南分析,发现了其根本的原则性一条,即各国批准上市的家用或医用消*剂、消*器械,均能够有效杀灭新型冠状病*,具体消*方法应按照产品说明书正确使用。美国CDC快速推出了中文版-nCoV防控指南,除了隔离、测体温、带口罩、手卫生等措施外,对病人高频接触的物体表面、衣物等,推荐使用稀释的漂白液(即5%次氯酸钠)或标签标有“EPA-批准”的家用消*剂。衣物,还可以采用衣物标签上推荐的最高温度来洗涤和干燥衣物。在家中配制漂白液时,应将1汤匙(15mL)漂白剂加入到1夸脱(mL)水中。如需更多漂白液,可将1/4杯(约60mL)漂白剂加入到1加仑(约mL)水中。这样大约稀释64倍,有效氯含量大约为mg/L。针对SARS疫情防控,美国CDC的指南中,除了隔离、PPE防护外,对消*的说明,仍然是使用任何EPA医院清洁剂消*剂,请遵循制造商关于使用稀释(即浓度),接触时间和处理时间的建议。针对MERS疫情防控,韩国*府推出的指南中,对消*方面有2个方面的说明,医院使用的医疗器械与设备,应遵循Spording的分类原则,选择高中低水平的消*;二是对清洁和环境消*,应选择次氯酸钠、酒精、酚类化合物、季铵化合物和过氧化合物适合用作环境的消*剂。使用环境消*剂时,应认真遵守稀释比例,接触时间和制造商规定的警告。针对今年暴发的新型冠状病*性肺炎疫情,WHO也发布了疑似感染者的防控指南。其中对消*方面,只提及了次氯酸钠消*液。要求每天使用含有稀释的漂白剂溶液(1份漂白剂兑99份水,有效氯含氯为mg/L)的常规家用消*剂清洁和消*经常接触的表面,如床头柜、床架和其他卧室家具。每天至少用含有稀释的漂白剂溶液(1份漂白剂兑99份水)的常规家用消*剂清洁和消*浴室和卫生间表面1次。使用常规洗衣皂和水清洗或用普通家用洗涤剂水温60~90℃下机洗病人的衣服、被褥、浴室和手巾等,并彻底干燥。
梵通生物研发的消*机器人KINO医院病房、隔离酒店、医院病房等环境进行终末消*,可以定期高水平消*。杀灭物体表面及空气中病原微生物,包括细菌繁殖体,病*、真菌、芽孢及各种多重耐药菌。医院环境及附属设施物体表面的病原体杀灭对数值≥5.00,确保物表菌落数CFU/cm2≤10.0,符合《医院消*卫生标准》的要求。医院空间中的自然菌消亡率达99%以上,确保病房空气平均菌落数≤4.0(5min)CFU/皿,符合《医院消*卫生标准》的要求。