RPMI是年从一名61岁男性浆细胞瘤患者的外周血中分离出的B淋巴细胞,它们可用于免疫学和免疫系统疾病的研究。该细胞系是合适的转染宿主。
基础信息
形态特征
与其他由外周血白细胞发展而来的细胞系相似,该细胞亦表现出淋巴母细胞形态特征。该细胞系未见典型的成熟浆细胞,但有未成熟浆细胞,胞浆染色较深。扫描电镜照片显示,几乎所有细胞内部都有一层围绕细胞排列的肿胀的内质网。这在其他细胞系中未曾出现,这些结构特征类似于发展中的浆细胞。该细胞培养物中未发现白细胞病*。
基因表达
该细胞仅表达游离形式的人类免疫球蛋白λ型轻链。
特点
目前,学界暂没有证据表明,RPMI细胞能产生重链(细胞质型或分泌型)。
病*易感性
人脊髓灰质炎病*1、单纯疱疹病*、痘苗病*、水泡性口炎病*等,都是RPMI细胞容易感染的。
细胞培养
#01细胞培养条件
RPMI-(PM)+10%FBS(-)+1%P/S(PB)。
#02生长特性
细胞主要以悬浮的单细胞形式生长,部分细胞可能贴壁生长(有时可达50%);
细胞大小不均一。
#03倍增时间
60小时(PubMed=);33.5小时(NCI-DTP);60-70小时(DSMZ)。
#04传代方式
建议传代密度为3-5×个活细胞/mL;生长密度不超过2-3×个活细胞/mL。
可通过补液、离心或更换新鲜培养基的形式培养此细胞,细胞传代培养密度控制在5×-2×活细胞/mL为佳。换液频率建议2-3次/周。
#05冻存和复苏
冻存密度:推荐冻存密度1×个活细胞/mL。
冻存条件:55%基础培养基+40%血清+5%DMSO;液氮保存。
RPMI生长图片RPMI生长图片·注意事项·
1、严格控制传代密度,密度过低或者过大都容易造成细胞死亡;
2、密度低的时候,尽量少动少离心,以减少对细胞的伤害;
3、状态不好时可补加2mM谷氨酰胺;
4、在培养过程中会出现细胞碎片过多的情况,可以用低速离心去除,一般为r/min,(由于低速离心会损失部分细胞,故此操作不适合细胞密度过低时使用);
5、冻存复苏时保证接种密度,复苏后维持培养环境的稳定,一般24h后再观察细胞状态。