近数十年以来，严重急性呼吸综合征冠状病*（SARS）、H7N9型禽流感和埃博拉病*（EBOV）等新突发传染病疫情，严重影响了人类健康。年底由严重急性呼吸综合征冠状病*（SARS-CoV-2）引起的COVID-19更是如此。
同其他新突发烈性传染病病原体的研究一致，由于SARS-CoV-2的高致病性和传染性，所有使用活病*评估相关产品效果的试验都必须在生物安全三级（BSL-3）实验室进行，很大程度上阻碍了疫苗和相关药物的研发进程。因此，急需一种代替活病*的病原体模型，降低生物安全等级，由此产生了一种新的免疫学技术——假病*系统。
假病*是什么？
假病*是指一种反转录病*整合了另外一种病*的囊膜糖蛋白，从而形成的具有外源性病*囊膜，而基因组仍保持着反转录病*本身基因组特性的病*。假病*的产生过程如图1所示[1]，用带有一种病*外膜蛋白基因的质粒与带有另一种病*骨架基因的质粒共转染到包装细胞（如T细胞）中，外膜蛋白基因在包装细胞表面表达出外膜蛋白，另一种病*的基因在包装细胞中转录翻译组装成病*颗粒，病*颗粒出芽时会被细胞表面表达的外膜蛋白所包装，即形成假病*。
图1.假病*的产生过程[1]
构建新冠假病*
首先，假病*内部核酸为缺陷型基因组，不能表达假病*颗粒表面蛋白，因此病*表面蛋白需要通过额外的质粒转染或细胞系稳定表达来实现。研究表明，新冠病*SARS-CoV-2是由病*S蛋白通过细胞hACE2受体结合进入细胞[2]，因此构建新冠假病*选择的胞膜蛋白为S蛋白。
其次，假病*的骨架载体包含了病*转录、包装、整合等基因序列，为假病*提供除膜蛋白外的其余所有蛋白。最常用的包膜病*假病*包装体系包括：慢病*（如HIV）载体包装体系、水疱性口炎病*包装体系（VSV）、鼠类白血病病*包装体系（MLV体系）和反向遗传学自组装假病*体系等[3]。
最后，由于通常情况下假病*只进行一轮感染，不具备复制增殖能力，因此可以使假病*系统携带报告基因，从而方便后续的定性、定量研究。常用的报告基因有萤火虫荧光素酶（Fluc）、海肾荧光素酶（Gluc）、绿色/红色荧光蛋白（GFP/RFP）、β-半乳糖苷酶（LacZ）和分泌型碱性磷酸酯酶（SEAP）等[4]。
图2.基于不同包装体系的假病*构建过程
假病*的应用
目前假病*主要分为模拟病*外膜结构的假病*和模拟RNA病*核酸状态的假病*。前者含有目的病原体的包膜蛋白，其表面蛋白具有天然结构，能够模拟真病*的受体结合、细胞进入、抗体识别等过程，使其广泛应用于病*的抗原学、细胞嗜性、受体识别、抗病*抑制剂筛选、抗体血清学试验、疫苗免疫原性中和抗体水平检测等研究领域[4]。后者则提高了RNA病*的稳定性，常用于RNA病*核酸阳性对照品，用于相应病*核酸诊断试剂提取、逆转录过程及检测的质量控制。
新冠疫情发生后，中检院合成了SARS-CoV-2的Spike基因序列，并建立了以SARS-CoV-2假病*为基础的中和抗体检测方法[6]。图3列出了SARS-CoV-2假病*的不同应用场景，以及不同的包装体系与报告基因的选择。
图3.SARS-CoV-2假病*的应用
另外，利用假病*感染hACE2基因敲入小鼠的动物模型，可以模拟SARS-CoV-2感染进入细胞的过程，用来评价体内交叉保护作用。相较于活病*感染小鼠模型，局限性在于假病*不能模拟病*复制和其他致病机制，因此假病*不能完全代替活病*动物实验，可能仅适合产生中和抗体的疫苗效果评价。
尽管如此，假病*系统还是具有其独特的优势。由于假病*不具备自我复制能力，只能进行单一周期的侵染，因此降低了病*突变率且具有较高的生物安全性。另外可以降低实验室操作的风险，替代活病*用于疫苗研发及免疫原性中和抗体水平检测，降低了操作难度与试验成本。
目前SARS-CoV-2感染引起的疫情依然严峻，假病*技术的不断成熟可以更好地在诊断、治疗和预防性防控产品的研发过程中发挥重要作用。
参考文献：
Kishko,Michael.().MolecularandFunctionalPropertiesofTransmittedHIV-1EnvelopeVariants:ADissertation.
JasperFuk-WooChanetal.EmergMicrobesInfect.Jan28;9(1):-.
CamiloAnsarah-Sobrinhoetal.Virology.Nov10;(1):67-74.
*维金，王佑春.假病*技术在新突发病*性传染病防控产品评价中的应用[J/OL].病*学报:1-10[-04-12].
QiXiangetal.MicrobiolRes.May;:.
JianhuiNietal.EmergMicrobesInfect.Dec;9(1):-.
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